aiuto nello svolgimento di alcuni problemi di biochimica

[sakura86]

Salve a tutti, devo svolgere alcuni esercizi di biochimica per non dover rifrequentare il corso, il problema è che non sono in grado e chiedo una mano a chi se ne intende, grazie mille a tutti!

1) Il dosaggio di un estratto cellulare per l’enzima fosfatasi alcalina ha dato come risultato ΔA/Δt = 0,1. Considerato che il Δε=18 mM^-1 cm^-1 a 410 nm nelle condizioni di saggio e che ho utilizzato 15 µl di estratto in un volume finale di 0,5 ml, calcolare le Unità enzimatiche per millilitro contenute nell’estratto.

2) Una curva di taratura per la determinazione colorimetrica della concentrazione di proteine con il metodo di Bradford ha dato i seguenti risultati:
BSA mg/ml Assorbanza a 595 nm
0,001 0,022
0,002 0,050
0,003 0,075
0,004 0,100
0,005 0,125
0,006 0,150
0,007 0,172
Riportare i dati su un grafico utilizzando carta millimetrata
Un campione a concentrazione ignota (X) è stato diluito 50 volte per essere saggiato con lo stesso metodo e le assorbanze ottenute per le prove in doppio sono state le seguenti: 0,012 e 0,014
Calcolare la concentrazione di proteine nel campione (X).


3) Devo preparare 500 ml di una soluzione del nucleoside adenosina 1 mM, considerato che il nucleoside ha un peso molecolare di 267,2, quanta polvere devo pesare? Considerato che l’adenosina a 254 nm a 25 °C e pH 7 ha ε = 14 mM-1 cm-1, quante volte dovrò diluire la soluzione per ottenere una assorbanza di 0,8 nelle stesse condizioni?

4) Ho preparato un estratto cellulare che ritengo contenere circa 10 mg/ml di proteine, devo comunque dosare il contenuto esatto. Considerando che userò il metodo Bradford quante volte devo diluire il mio campione per poter utilizzare la curva di taratura descritta nell’esercizio 2? .

5) Una proteina monomerica contenente il gruppo eme ed in grado di legare reversibilmente l’ossigeno, mostra una P50 di 15 Torr. A quale pressione parziale di ossigeno si può considerare satura al 99%?



Il terzo esercizio l'ho svolto così, se avete accorgimenti da dirmi fatemi sapere:

Esercizio 3)
1mM = 10^-3 M = 10^-3 mol/L
500mL = 0.5L

10^-3 mol/L * 0.5L = 5*10^-4mol

5.10^-4mol * 267.2g/mol = 0.136g di adenosina

A = e*[adenosina]*l

(è la legge di Lambert-Beer:

Assorbanza = epsilon * concentrazione dell'adenosina * elle

dove

epsilon = e = coefficente di estinzione molare dell'adenosina a quella lunghezza d'onda (14mM^-1*cm^-1)
e
elle = l = cammino ottico = lunghezza della cella portacampione = 1 cm (in genere))


l = cammino ottico = 1cm (in genere)

0.8 cm-1 = 14mM-1 cm-1 * XmM =>
=> X = 0.8 / 14 = 0.05714mM

1mM * Vi = 0.05714mM * Vf

Vf = Vi * 1 / 0.05714 = 17.5
diluire 17.5 volte

GRAZIE A CHIUNQUE MI DIA UNA MANO